薄層色層分析 ─ 下

薄層色層分析 (Thin Layer Chromatography, TLC) ─ 下
國立竹北高級中學生物科張雅菱老師/國立臺灣師範大學生命科學系張永達副教授責任編輯

請參閱薄層色層分析 (Thin Layer Chromatography, TLC)-上

與固定相親和力較差（與流動相極性較為相似）的物質將會被帶到薄片較上方的位置；反之，與固定相親和力較大（固定相極性較為相似）的物質將不容易被流動相帶動而停留在較下方的位置，也因此樣本內的物質將可依據其極性而被分離開來。

當展開劑移動到薄片（固定相）的最上方時，將薄片自容器中取出並晾乾。若分離的物質是有顏色的，則可以肉眼在薄片上看出顏色；但大部分的物質是沒有顏色的，可利用紫外光 (UV light) 照射，或其他合適的染色方法使其顯現位置。

自起點處到最後停留位置間的距離與展開劑可移動之最大距離的比值，我們稱為Rf值 (retention factor value)。透過Rf值的計算，我們就可以知道樣本內各種化合物的極性，亦可進一步將薄片上的矽膠或礬土給刮除下來，作進一步的純化以便鑑定分析此化合物的成分。

在生物分析上，最常用的例子是利用TLC來分離植物的光合色素。以菠菜為例：將葉子研磨並過濾後的濾液滴在矽膠薄片上，利用石油醚和90％丙酮(9:1)當作展開劑。此時固定相（矽膠上有具極性的Si-O鍵）與濾液內具有極性的物質間最大的作用力為偶極—偶極力（dipole-dipole interaction，極性分子因電荷分佈不均使產生偶極矩，當兩個極性分子靠近時，會造成電性的吸引），因此當濾液中極性越大的分子與固定相間的偶極力越大，越容易被吸附住；反之極性越小的分子與矽膠間的作用力越小，越容易隨著展開劑移動到較遠的地方。結果可發現極性最小的類胡蘿蔔素 (carotene) 其Rf最大，其次是葉綠素a、葉綠素b，而極性最大的葉黃素(lutein)，移動距離最小，其Rf值最小。若改變展開劑的成分比例，因為流動相的極性改變，所得結果將會有所不同。由此可知，進行TLC時，展開劑的選擇是很重要的。

參考資料
1.Thin layer chromatography
http://en.wikipedia.org/wiki/Thin_layer_chromatography
2.Thin Layer Chromatography – TLC
http://orgchem.colorado.edu/hndbksupport/TLC/TLC.html